MIHINANA. Chudinova, V.A. Platonov, A.V. Alexandrova, S.N. Elansky
Vao haingana, naseho fa ny holatra ascomycete Ilyonectria crassa dia afaka manafika ny ovy. Ity asa ity no voalohany nanadihady ny toetra biolojika sy ny fanoherana ny fungicide sasany amin'ny karazana I. crassa natokana amin'ny ovy. Ny filaharan'ireo faritra manokana amin'ny karazana "ovy" dia nifanandrify tamin'ireo efa azo teo aloha ho an'ny holatra mitoka-monina amin'ny fakan'ny narcissus, ginseng, aspen sy beech, takamoa lisy ary ravin-tulip. Raha ny fahitana azy dia maro ny zava-maniry an-jaridaina sy zaridaina no azo tahirizina ho an'ny I. crassa. Ny voan'ny voan'ny voatabia sy ovy no voan'ny aretina, saingy tsy voan'ny voankazo voatabiha iray manontolo na ny vomanga ovy iray. Izany dia mampiseho fa ny I. crassa dia katsentsitra fery. Ny fanombanana ny fanoherana ny fludioxonil, difenoconazole ary azoxystrobin amin'ny fitaovana mahavelona dia nampiseho ny fahombiazan'ireo fanafody ireo.
Ny mari-pamantarana EC50 (fihenan'ny fungicide izay mihena in-2 amin'ny tahan'ny fitomboan'ny zanatany raha oharina amin'ny fifehezana tsy fungicide) dia mitovy amin'ny 0.4; 7.4 sy 4 mg/l. Ny mety hisian'ny aretina vokatry ny I. crassa dia tokony hojerena rehefa mandinika ny phytopathologically ovy tubers sy ny fampandrosoana ny fepetra fiarovana ny zavamaniry.
Ny fivoaran'ny microorganisms phytopathogenic dia mitarika fatiantoka be amin'ny dingana rehetra amin'ny fambolena sy fitehirizana ovy. Rehefa manomana fepetra fiarovana, toy ny fitsipika, ny pathogens fanta-daza dia raisina an-tsaina, toy ny karazana karazana Alternaria, Fusarium, Phoma, Helminthosporium, Colletotrichum, Phytophthora, sns. Na izany aza, tato anatin'ny taona vitsivitsy, dia nitombo ny tatitra nipoitra. momba ny fisehon'ireo zavamiaina bitika phytopathogenic vaovao amin'ny ovy. Ny biolojian'izy ireo dia tsy nodinihina tsara, ny fahombiazan'ny fungicides ampiasaina amin'ny ovy amin'izy ireo dia tsy fantatra, ary ny fomba diagnostika dia tsy novolavolaina. Rehefa mivoatra faobe izy ireo, dia mety hiteraka fahavoazana lehibe amin'ny voly ovy. Ny iray amin'ireo zavamiaina bitika ireo dia ny holatra ascomycete Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous, izay hitan'ny mpanoratra voalohany momba ny ovy ovy (Chudinova et al., 2019).
Ity lahatsoratra ity dia manolotra ny valin'ny famakafakana ny tsindrin-tsakafo I. crassa natokana tamin'ny ovy iray. Ny morphologie ny zanatany sy ny firafitry ny mycelial an'ny I. crassa, ny filaharan'ny nucleotide amin'ny fizarana ADN manokana karazana, ny virulence amin'ny ovy sy ny voatabia, ary ny fanoherana ny fungicide malaza sasany dia nodinihina.
Fitaovana sy fomba fiasa
Ny tebiteby ampiasaina amin'ity asa ity dia I. crassa 18KSuPT2, mitoka-monina amin'ny taona 2018 avy amin'ny voan'ny ovy voan'ny aretina mitombo ao amin'ny faritra Kostroma. Ny tuber dia voan'ny lo maina miaraka amin'ny lavaka voarakotra amin'ny mycelium volontany. Amin'ny fampiasana fanjaitra fanindronana sterile, dia nafindra tao anaty lovia Petri miaraka amin'ny medium agar (beer wort 10%, agar 1.5%, penicillin 1000 units/ml) ny mycelium fungal. Ny lovia dia natsipy tao anaty haizina tamin'ny 24 ° C.
Ho an'ny sary, fanombanana ny habe sy ny morphologie ny spores sy ny taova sporulation dia nampiasaina ny mikraoskaopy maivana Leica DM2500 miaraka amin'ny fakan-tsary nomerika ICC50 HD ary ny mikraoskaopy Leica M80 miaraka amin'ny fakan-tsary nomerika IC80HD (Leica Microsystems, Alemaina).
Mba hanokafana ny ADN, ny mycelium fungal dia nambolena tao anaty medium pea, avy eo nivaingana tamin'ny azota azota, homogenized, natsipy tao anaty buffer CTAB, nodiovina tamin'ny chloroform, ary nosasana indroa tamin'ny alikaola 2%.
Ny fomba fitrandrahana ADN dia voafaritra amin'ny antsipiriany ao amin'ny lahatsoratra nataon'i Kutuzova et al. (2017).
Mba hamaritana ny maha-karazana karazana amin'ny fomba molekiola sy ny fampitahana amin'ny karazana I. crassa hafa fantatra, dia natao ny PCR miaraka amin'ny primers izay mamela ny fanamafisana ny faritra ADN manokana: ITS1-5,8S-ITS2 (primers ITS5 / ITS4, White et al., 1990), faritra misy fototarazo b -tubulin (Bt2a / Bt2b, Glass sy Donaldson, 1995) ary ny fanitarana ny fandikan-teny 1α (tef1α) (primers EF1-728F / EF1-986R, Carbone sy Kohn, 1999). Amplicons amin'ny halavany ilaina dia nalaina avy amin'ny gel mampiasa ny CleanUp kit avy amin'ny Evrogen. Ny faritra nohamafisina dia nalamina tamin'ny fampiasana ny BigDye®Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, CA, USA) amin'ny Applied Biosystems 3730 xl automated sequencer (Applied Biosystems, CA, USA). Ny filaharan'ny nucleotide azo dia nampiasaina hitadiavana lalao tao amin'ny angon-drakitra GenBank an'ny US National Center for Biotechnology Information (NCBI). Ny famakafakana phylogenetic dia natao tamin'ny alàlan'ny programa MEGA 6 (Tamura et al., 2013).
Ny famaritana ny virulence dia natao tamin'ny voankazo maitso manontolo amin'ny voatabia be voankazo (karazana Dubrava) sy ovy (variety Gala). Ho fanampin'izany, mba hanahafana ny fahasimbana amin'ny voankazo sy ny tubers simba, dia nampiasaina ny silaka ny voankazo sy ny tubers mitovy. Ny silaka tuber dia napetraka tao anaty efitrano mando, izay lovia Petri misy taratasy sivana mando eo ambany. Napetraka teo amin'ny taratasy ny fitaratra fitaratra iray, izay napetraka teo amboniny ireo tapa-kazo na voankazo. Napetraka tao anaty fitoeran-javatra misy taratasy sivana mando any ambany koa ny ravinkazo sy voankazo manontolo. Apetaho eo afovoan'ilay tapa-kazo (na eo amin'ny tampon'ny tuber na voankazo) miaraka amin'ny hyphae holatra ny ampahany amin'ny agar (5x5 mm) misy hyphae holatra rehefa avy nambolena 5 andro tamin'ny wort agar.
Ny fanoherana ny tadin'ny holatra amin'ny fungicides dia nodinihina tamin'ny toe-javatra laboratoara tamin'ny media nutrient agar. Nianarantsika ny mety hisian'ny fanafody fungicide Maxim, KS (fludioxonil active ingredient, 25 g/l), Quadris, KS (azoxystrobin 250 g/l), Skor, CE (difenoconazole 250 g/l) (Katalaogin'ny fanjakana..., 2020). ). Ny fanombanana dia natao tao amin'ny lovia Petri amin'ny media wort-agar miaraka amin'ny fanampiana ireo zava-mahadomelina nodinihina amin'ny fifantohana amin'ny singa mavitrika 0.1; 1; 10 ppm (mg/l) (ho an'ny fludioxonil sy difenoconazole), 1; 10; 100 ppm (ho an'ny azoxystrobin) ary amin'ny fitaovana tsy misy fungicide (fifehezana). Ny fungicide dia nampidirina tao amin'ilay efa levona ary nangatsiaka hatramin'ny 60 ° C, ary avy eo dia narotsaka tao anaty vilia Petri. Ny bloc agar misy mycelium fungal dia napetraka eo afovoan'ny lovia Petri ary ambolena amin'ny hafanana 24 ° C ao anaty haizina. Rehefa afaka 7 andro incubation, ny savaivony ny zanatany dia refesina amin`ny roa tondro perpendicular; ny vokatra fandrefesana isaky ny zanatany dia natao salan'isa. Ny fanandramana dia natao tamin'ny triplicate. Miorina amin'ny valin'ny fitsapana, ny fanondroana EC50 dia nokajiana, mitovy amin'ny fifantohana amin'ny fungicide izay nampihena ny tahan'ny fitomboan'ny radial ny zanatany raha oharina amin'ny fanaraha-maso tsy misy fungicide.
Valiny sy dinika
Ao amin'ny lovia Petri misy wort agar, ny holatra dia namorona zanatany misy mycelium fotsy. Nivadika mena-volontsôkôlà ny mpanelanelana eo ambanin'ny mycélium. Rehefa maina ny antonony, ny holatra dia namorona karazana spores roa amin'ny conidiophores tokana ary ireo natambatra ho sporodochium kely. Ny macroconidia dia lava, cylindrical, misy septa iray ka hatramin'ny telo, salan'isa 27.2 µm amin'ny sandany 23.2 hatramin'ny 32.2 µm, sakany - hatramin'ny 4.9 µm (sary 1). Ny salan'isan'ny microconidia dia 14.3 µm miaraka amin'ny sanda isan-karazany manomboka amin'ny 10.3 ka hatramin'ny 18.1 µm, sakany - hatramin'ny 4.0 µm. Ny endri-tsoratra macro- sy micromorphological rehetra dia tafiditra ao anatin'ny karazana fiovaovan'ny karazana Ilyonectria crassa (Cabral et al., 2012).
Ny filaharan'ny faritra ADN manokana (ITS, b-tubulin, TEF 1α) dia nifanojo tanteraka tamin'ny filaharan'ny tsipika I. crassa nodinihinay teo aloha (Chudinova et al., 2019, Table 1). Mba handinihana ny fihanaky ny I. crassa any amin'ny faritra hafa sy hamakafaka ny habetsaky ny voly voakasik'izany, dia nodinihina tao amin'ny tahiry GenBank ny fizotry ny ADN mitovy amin'izany (Table 1). Ny fifandimbiasana dia eo amin'ny 86 ka hatramin'ny 100%. Ny filaharan'ireo faritra telo ADN amin'ny karazana "ovy" an'ny I. crassa dia nitovy tamin'ny filaharan'ireo tsipika mitokana avy amin'ny tambolin'ny lily sy ny fakan'ny narcissus any Holandy ary avy amin'ny fakan'ny ginseng any Canada. Tsy afaka nahita karazana I. crassa hafa izahay miaraka amin'ireo filaharana mitovy amin'ny telo nodinihina tao amin'ny tahiry misokatra. Na izany aza, ny famakafakana ny filaharan'ny ITS sy ny b-tubulin dia naneho ny fisian'ny I. crassa amin'ny ravina tulipe any Angletera. Ny holatra miaraka amin'ny filaharana ITS mitovy amin'izany dia fantatra rehefa nandinika ny mycobiota ny fakan'ny aspen any Canada sy beech any Italia, ary ny ovy ao Arabia Saodita (Tabilao 1). Ny valin'ity fanadihadiana ity dia manondro fa ny I. crassa dia manana fizarazarana maneran-tany ary afaka manafika karazana zavamaniry samihafa.
Rehefa mamaritra ny pathogenicity amin'ny voatabiha sy ovy amin'ny andro faha-5, dia nahatratra 1.5 cm ny savaivony ny lesion, miaraka amin'izay koa, ny tsindrin-tsakafo nodinihina dia tsy voan'ny voan'ny voatabia iray manontolo na ny tuber ovy. Na izany aza, tsikaritra tamin'ny voatabia ny fahasimban'ny sepal. Mba hanilihana ny mety hisian'ny fandotoana, dia natokana ho kolontsaina madio avy amin'ny mycelium izay nipoitra teo amin'ny tapa-kazo ovy ny fitokana-monina holatra. Mitovy tanteraka amin'ny tebiteby ny ray aman-dreny. I. crassa dia toa parasy fery.
Ny fitsaboana alohan'ny fambolena ny tubers amin'ny fungicide dia mety hampihena ny fivoaran'ny aretina amin'ny zavamaniry mandritra ny vanim-potoanan'ny fitomboana. Mba hisafidianana fungicides mahomby dia ilaina ny manombatombana hoe iza no mahomby amin'ny I. crassa. Ny asa dia nianatra be mpampiasa mavitrika ny fungicides - fludioxonil, azoxystrobin, difenoconazole. Fludioxonil dia ampahany amin'ny fanomanana mifangaro maromaro ampiasaina amin'ny fikarakarana ny voa sy ny tubers alohan'ny hambolena. Ny Fludioxonil (Maxim) koa dia ampiasaina amin'ny fitsaboana ny voan'ny voa alohan'ny fitehirizana. Ny difenoconazole sy azoxystrobin dia tafiditra ao anatin'ny fanomanana maromaro ampiasaina amin'ny fanodinana akora voa, ary koa amin'ny fanomanana natao ho an'ny fanodinana zavamaniry (Katalaogin'ny fanjakana..., 2020).
Ny tahan'ny fitomboan'ny I. crassa dia nodinihina tamin'ny haino aman-jery (sary 2) miaraka amin'ny fifantohana samihafa amin'ny akora mavitrika: fludioxonil (EC50 = 0.4 ppm), azoxystrobin (EC50 = 4 ppm) ary difenoconazole (EC50 = 7.4 ppm) (Table 2) . Ireo fanafody ireo dia azo heverina ho tena mahomby amin'ny I. crassa, satria ny EC50 dia ambany lavitra noho ny fatran'ny zava-mahadomelina ao amin'ny fluid miasa ampiasaina amin'ny fitsaboana ny tubers. Araka ny filazan'ny State Catalog... (2020), ny fifantohan'ny fludioxonil amin'ny ranom-boankazo amin'ny fitsaboana ny tubers ovy dia manomboka amin'ny 500 ka hatramin'ny 1000 ppm, azoxystrobin (ao amin'ny ranon-tsavony amin'ny fitsaboana ny faran'ny vava) - 3750-9375 ppm, difenoconazole (ao amin'ny ranon-javatra ho an'ny fitsaboana zavamaniry vegetative) - 187.5-625 ppm.
Tabilao 1. Ny fitovian'ny filaharana eo amin'ny filaharan'ny karazana 18KSuPT2 sy ny Ilyonectria crassa hita ao amin'ny tahiry Genbank
aretina | Zavamaniry mpampiantrano, toerana fivoahana | Laharana filaharana napetraka ao amin'ny GenBank, isan-jaton'ny fitoviana | rohy | ||
NY | β-tubulin | TEF 1α | |||
17KSPT1 sy 18KSuPT2 | Potato tubers, faritra Kostroma. | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova et al., 2019, ity asa ity |
CBS 158/31 | Narcissus roots, Holandy | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Cabral et al., 2012 |
CBS 139/30 | Lily bulb, Holandy | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Ginseng root, Kanada | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735/725 99.6 |
|
RHS235138 | Ravin'ny Tulip, UK | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | Denton, NY, 2014 |
MT294410 | Aspen roots, Kanada | MT294410 100 | ND | ND | Ramsfield et al., 2020 |
ER1937 | Buc, Italy | KR019363 99.65 | ND | ND | Tizzani, Haegi, Motta. Fandefasana mivantana |
KAUF19 | Tuber ovy, Arabia Saodita | HE649390 98.3 | ND | ND | Gashgari, Gherbawy, 2013 |
ND = tsy napetraka
Tabilao 2. Ny fanoherana ny Ilyonectria crassa amin'ny fungicide
(zavatra mavitrika) | EC50, ppm | ||||
3 andro | 5 andro | 7 andro | |||
fanaraha-maso | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
Quadris, KS (fzoxystrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
Maxim, KS (fludioxonil) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
Score, EC (difenoconazole) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
Ao amin'ny asa ataonay dia notokanana tamin'ny ovy ovy tany amin'ny faritr'i Kostroma sy Moskoa ny tadin'ny I. crassa (Chudinova et al., 2019). Ny ampahany betsaka amin'ny tadin'ny holatra miaraka amin'ny filaharany ITS mitovy amin'ny I. crassa dia hita tamin'ny famakafakana ny mycobiota amin'ny tubers ovy any Arabia Saodita (Gashgari sy Gherbawy, 2013). Toa tsy fahita firy ny I. crassa amin'ny ovy araka ny hita. Ny fanandramana nataonay dia nampiseho fa ny holatra dia mety hifindra amin'ny voankazo voatabiha simba. Fantatra avy amin'ny literatiora fa ny I. crassa dia afaka mivoatra amin'ny saprotrophique amin'ny tany (Moll et al., 2016), ary koa mamindra karazana zavamaniry isan-karazany, eny fa na dia ireo lavitra amin'ny teny taksonômika toy ny daffodils, lilia, ginseng, aspen, ary beech (Table 1). Raha ny fahitana azy dia maro ny zava-maniry an-jaridaina sy zaridaina no azo tahirizina ho an'ny I. crassa. Ny etsy ambony dia mampiseho fa rehefa mamolavola fepetra fiarovana dia ilaina ny mandinika ny mety hisian'ny fahasimbana amin'ny tubers ovy amin'ity holatra ity. Ny fiomanana be mpampiasa amin'ny fitsaboana ny ovy tubers, misy fludioxonil, azoxystrobin ary difenoconazole, dia naneho ny fahombiazan'ny fungicidal amin'ny I. crassa.
Ny asa dia notohanan'ny Russian Foundation for Basic Research (fanomezana No. 20-016-00139).
Navoaka tao amin'ny gazety "Bulletin of Plant Protection", 2020, 103(3) ilay lahatsoratra.